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关于纳米药物系统的行业调研报告
前言
随着现代给药系统理论的研究不断深入，高分子科学的不断发展，药物系统的研究品种和剂型也在不断变化和增多。新兴的科技也在不断应用于药物制剂领域，纳米技术就是其中较为成熟的一种技术，已经被普遍应用于各个领域和医药卫生行业。尤其在药物制剂方面作用更突出。研究发现大多数物质一旦达到纳米的尺度时，其物质的性能就很可能发生突变，出现一些不同于其宏观形式与分子形式的特殊性能这些特点都可以作为新型药物开发的基础，标志着药物研发进人一个全新的时代。因为现代药学制剂的研究就是利用新型高科技的手段，制造新型药物，摒弃传统药物的束缚，使药物具有更多的优点，纳米药物就具有这些优点。为人们更好的战胜疾病提供了可能和帮助。
一、发展历史与背景
1.1什么是纳米技术
纳米，作为一种长度单位，符号为nm。1纳米相当于1毫微米，也就是十亿分之一米，大约10个原子的总长度。
纳米科学与技术，有时简称为纳米技术，是研究结构尺寸在0.1一100nm范围内电子、原子以及分子内的一般运动规律和特性的一项崭新的技术，也就是纳米级的制造技术。科学家们在不断的研究，发现在物质构成的过程中，纳米尺度下隔离出来的可数原子或分子，可以显著地表现出许多新的特性，合理的利用这些特性制造具有特定功能 的设备的技术，就是所谓的纳米技术。纳米技术其实就是一种用单个原子、分子射程物质的技术。
据研究发现，迄今为止，纳米技术经历了三种概念，具体分别为：首先是1986年由美国的科学家德雷克斯勒博士提出的分子纳米技术，主要是在《创造的机器》一书中进行了描述。通过这一描述我们可以得到，纳米技术可以使分子组合的机器实现实用化，因此可以将所有不同类型的分子进行重新组合，就可以得到各种各样的分子结构，可惜当时的研究并未将这一概念推广，也就是说分子纳米技术学说未取得重大进展；其次是把纳米技术的概念定位为微加工技术的极限。换句话说就是通过在纳米精度层面的“加工”来人工形成纳米大小的结构物质的一种技术。这种极限纳米级的加工技术，理论上讲发展终会达到极限，也就说发展会受到限制。最后一种概念是科学家从生物的角度出发而提出来的，因为生物在细胞和生物膜内本身就存在纳米层面的结构，也就是说纳米粒子与纳米结构与生 物体息息相关，有着密切的联系。举例说明：核糖核酸蛋 白质复合体是生物体内构成生命的要素之一，其粒度大小为15一20nm之间，也相当于一种纳米微粒；还有存在于生物体内的各种各样的病毒也属于纳米粒子的范畴；同时纳米技术已经应用于生命科学研究领域，SiO2的纳米级微粒可应用于进行细胞分离，金的纳米粒子被应用于进行定位病变的临床治疗，使不良反应 大大减少等。研究纳米生物学技术，可以在纳米层面上了解生物生命大分子的精细结构与功 能特性的关系，获取生命信息，尤其是制造纳米药物制剂，通过纳米层面吞噬病毒、细菌、疏通血管血栓，清除大动脉脂肪沉积物、甚至杀死癌细胞等。
1.2生物制药
在生产和商业模式上，生物制药业与传统制药业有很大的不同。利用基因工程、DNA重组技术、蛋白质工程、基因治疗并且结合新兴技术，如研制开发和生产生物芯片等，都是生物制药的研究范畴。单克隆体、干扰素、蛋白、疫苗、酶、多肽、激素和细胞生长因子等都是生物制品涉及的药物类型。癌症、免疫系统疾病、糖尿病、艾滋病、冠心病、风湿性关节炎、贫血、血友病、囊性纤维变性和一些罕见的遗传性疾病都已经广泛地被生物制药药物进行有效治疗。国际生物制药产业，目前主要集中在美国日本和欧洲，其中又以现代生物技术发源地的美国为重要的发明和生产地。近年来，中国开发出了一大批新的生物制药特效药物，解决了过去用常规方法不能生产或者生产成本特别昂贵的药品生产技术问题。
1.3纳米生物制药
《美国商业周刊》指出:21世纪可能取得重大突破的三个领域有纳米技术领域信、息科学与技术和生命科学与生物技术，这一观点获得各个国家和科研人员的赞成。当前，纳米科学与技术正在快速地向前发展，并不断与各个学科交叉、融合，创造出新的研究领域和新的学科生长点。特别是近几年来，纳米技术快速向生物制药领域渗透，产生了一门崭新的研究领域——“纳米生物制药”领域，该领域的进步与发展为现代纳米技术、生物学和制药的研究提供了新技术和新视角。“纳米生物制药”是一门结合“纳米科学”与“生物制药”的重大高新技术领域。纳米技术与生物制药技术的结合，使得纳米材料在生物制药领域有了广泛的应用前景，为它在生物制药领域开辟了巨大的市场潜力。纳米技术将使生物制药的药物生产实现低成本、高效率、自动化、大规模化。特别是纳米技术将使得生物制药产品实现器官靶向化，这将成为最热门的课题。纳米级生物制药的药物颗粒或分子可以直接用于治疗疾病，由于它们自身的结构具备独特的生物效果，从而区别于传统的化疗药物，实现传统的给药方式不能达到的微量、高效、稳定、靶向定位等目标。而利用纳米粒子作为药物和基因输送载体，可延长药物作用时间; 可达到器官靶向定位目的; 可提高药物的效果，减少毒性和副作用; 可产生一些新的给药途径。
目前，世界各国在纳米生物制药技术研究方面都处于起步阶段，日本、以色列等国都明确将纳米生物制药技术作为其纳米科学技术重点发展的战略方向，其他国家在这一领域也必然会展开激烈的科技竞争。中国纳米生物制药技术研究目前还处于起步阶段，因此，采用科学的方法分析纳米生物制药相关技术发展状况，分析各国在纳米生物制药研究上的实力，明确我国纳米生物制药技术在国际上的地位，从宏观层面可以对纳米生物制药发展战略研究、纳米生物制药科研项目规划、纳米生物制药的产业化策略研究提供依据，从微观层面可以为其科学研究项目的具体实施路线及企业发展策略提供指导。
二、技术知识
2.1纳米药物制剂
在药剂学领域一般纳米范围包括了大小在100nm以上的亚微米粒子，正是由于物质的物理空间发生了改变，才使得物质的理化特性、生物学特性等发生了巨大变化。纳米技术在药学领域中的应用，已成为一种前沿科学不断被研究。近几年，纳米技术已经广泛被用于药物的制备，并且研究发现纳米技术可以使药物的稳定性更强、对胃肠道的刺激会减少很多、不良反应少以及药物利用度较高等优点。
一般药剂学中所指的纳米粒是：纳米载体和纳米药物，其中纳米载体指的是指可以溶解和分散各种药物的多种纳米粒，具体包括：纳米球、聚合物纳米囊、纳米脂质体以及聚合物胶囊等；而纳米药物则是指利用纳米技术将原料药直接加工成纳米粒，纳米粒的实质其实就是微粉化技术、超细粉技术的进一步发展。纳米药物制剂相比于传统的药物制剂，具有显著的优越性，下面具体介绍用纳米技
1纳米乳液：是一类通过纳米微乳化技术制术制备的纳米新型药物的几种形式：○
成的微粒直径在纳米级且热力学和动力学稳定的胶体分散体系。微乳液主要是由水相、油相、表面活性剂以及助表面活性剂构成，形成外观透明或半透明的液状稳定体系。微乳液是通过微乳化技术形成的制剂，使药物或者物质更有利于穿透生物膜而被吸收。纳米乳液主要是促进药物的经皮吸收，使药物的消除半衰期延
2纳米凝胶：长，生物利用度提高。○其主要是一种新型的通过纳米技术载药系统，
使纳米级聚合物在结构上网络组成一种水凝胶颗粒，主要包括物理凝胶和化学凝胶两种。由非共价键形成物理凝胶；由交联共价键形成化学凝胶，使其具有较强的负载能力以及良好的稳定性能，达到靶向治疗的目的，效果好，生物利用度较
3固体脂质纳米粒(SLN)：一般是指物质粒径在10一1000nm之间，呈固态高。○
胶体颗粒状，主要是以常温下固态的天然或合成类脂为载体的一种新型给药系统。研究发现SLN不但可以控制药物的释放 速度还可以避免药物的泄漏或者药物的降解，具有良好的靶向治疗的优点等。SLN还是一种抗肿瘤药物的载体，
4聚合物纳米粒：分人工合成与天然可以更好地将癌细胞杀死，抗癌有效性高。○
形成两种，一般粒径为介于10一1000nm之间的固态胶体颗粒，是一种具有高效、低毒的靶向药物载体。聚合物纳米粒已被成功应用于人工化学合成药物以及
6纳米药物结晶：主要是利用各种不蛋白类药物等领域，具有很好的发展前景。○
一样的技术将药物转变为纳米微粒，一般粒径<1000nm，分散形成所谓的纳米晶体。其具有容易未定性能，毒性较低等特点。但纳米药物结晶可以适用于几乎所有的药物种类，甚至是对水有高度敏感的药物也可以制备成纳米结晶。 2 . 2 载体材料
由于药物的作用对象是人体，所以首先要求载药材料必须是无毒；其次，生物相容性好，且可生物降解，不与药物发生化学反应以致失去药效；最后，载体材料需有一定的强度，与药物结合后稳定，同时给药后能以一定的速度释药。 载体材料可分为天然高分子和人工合成高分子材料两大类。天然材料有脂类、糖类、蛋白质等；合成的高分子材料最主要的有聚氰基丙烯酸烷酯(PACA) (包括甲酯、乙酯、丁酯、异丁酯、已酯及异已酯、十六烷基酯)和聚酯(包括聚乳酸、聚丙交酯、聚已内酯、聚已醇酸、聚羟丁酸、聚羟戊酸、癸酸等)及其衍生物和共聚物，这是因为它们具有如下优点：有高度的亲水性，便于制备，制得 N P 大小均匀，与血浆的聚结趋势小，能生物降解，毒性小等 。
2 . 3 制备方法
纳米微粒有高吸附性，载体和药物主要是通过溶解包裹作用使药物位于粒子内部或吸附附着作用以及分子上活性基团使药物位于粒子表面。主要制备方法有 2 .3 . 1 萃取及挥发法
一般是先将药物加入到高分子载体的有机溶剂中，再加入乳化剂搅拌或其它方法 ( 如超声) 进行乳化，得到 W/ O 的乳状液，之后使有机溶剂自然挥发或在一定温度下挥发。也可以先把乳化液加入到稳定剂( 如聚乙烯醇、吐温、司盘等) 水溶液中，得 W/ O/ W 的复合乳液，再使有机溶剂挥发，制得纳米药物。该法应用最为广泛，主要分两步进行，即乳液的制备和溶剂的除去。通常根据包载液的性质可制成 O/ W、W/ O、W/ O/ W 或 O/W/ O 型乳状液。
2 . 3 . 2 乳液聚合法
是先将高分子单体和引发剂溶于水相，加入乳化剂形成乳化胶束，在引发剂的作用下使单体聚合，把药物裹于聚合体内。如氰基丙烯酸酯 ( ACA) 加入药物和右旋糖苷或非离子表面活性剂中持续搅拌即可得 PACA - NC。
2 . 3 . 3 界面聚合法
单体从一侧向界面扩散，催化剂从另一侧向界面扩散，药物位于中间的液体分散相内，利用界面处发生的聚合反应制成药物包囊。如脂肪及 ACA 溶于无水乙醇中制成油相，将表面活性剂溶于水中形成水相，在连续搅拌下将油相慢慢地加入水相中，即可制得 PACA - N S。
2 . 3 . 4 界面沉淀法
该法先让药物和高分子或小分子化合物作用形成药物的盐形式 ( 或让盐再转化成自由酸或自由碱)，使药物的水溶性下降而稳定性提高；其次把高分子载体溶于有机相，而药物溶于油相；再把此两相体系注入含有表面活性剂的水溶液中。有机溶剂迅速地穿透界面，显著地降低了界面张力，自发地形成纳米微粒，使得逐渐不溶的高分子向界面迁移、沉淀，最终形成纳米级药粒。
2 . 3 . 5 等电临界法
等电临界法是制备纳米药物微粒的新方法。 常律用该法制备出0 - 氧羧甲基甲壳胺( O - CMC) 甲氨喋呤( M TX) 毫微粒。过程是：将一定量的O - CMC水溶液与表面活性剂 Plu2conic F - 68 及一定量的 M TX 混匀，加入等电点调节剂调节剂 N H4O H，用分光光度计控制体系的等电临界点，加入戊二醛水溶液，交联 l h 后加入反应终止剂。
2 . 3 . 6 凝聚法
有单相凝聚和复合凝聚之分
，由相分离所生成的高分子浓溶液的微小液滴即所谓凝胶层在核物质周围围附着形成包膜。该过程在水溶液介质中进行，凝聚混合物有水相与凝聚相之分，该法用于与水凝胶层在核物质周围不溶混的液体或不溶于水的固体包覆。
三、前沿技术
3.1市场新型纳米颗粒药物
爱尔兰 El a n 公司开发出一种叫做“NanoCrystal”的纳米技术, 能将难溶性药物转化成纳米粒子, 从而促进难溶性药物的传递。“NanoCrystal”是一种具有自主知识产权的高能湿磨技术, 纳米药物粒子在选择性的稳定剂的表面吸附作用下保持稳定, 药物的水溶液也可保持稳定的性质, 可以应用到已经成形的制剂中。El an 公司纳米晶体技术所用的介质是高度交联的聚苯乙烯小球, 经过加工后能够承受极大的剪切力 , 因此在纳米微粒制作过程中介质的损耗极小。用这种方法制造出来的纳米药物微粒纯度很高, 微粒大小十分均匀且不同批次生产的微粒大小基本一致。
惠氏 - 强效免疫抑制剂 Rapamun e 片剂。 雷帕鸣: 作用机制独特, 完全不
同于钙调磷酸酶抑制剂, 可明显降低移植病人的肿瘤发生率。雷帕鸣是第一个 被FDA批准的可以安全撤除环孢菌素 A 的基础免疫抑制剂。
默克 - 化疗止吐药 E mend 胶囊Emend ( Aprepitant ) - 阿瑞吡坦, 它是由 F D A批准的第一种可帮助患者避免因化疗引起恶心及呕吐等症状持续发生的药物。
帕尔制药-激素药物 M e g a ce ES ( 甲地孕酮) : 2 00 5 年7月, 美国 F D A 批准的醋酸甲地孕酮纳米结晶浓口服混悬剂上市, 采用礼来公司的纳米结晶技 术释药系统来改善原剂型的溶出度和生物利用度。经过湿磨技术处理得到醋酸甲地孕酮纳米晶体, 分散于水溶液中形成胶状的口服药。本品用于治疗确诊的艾 滋病患者厌食、 恶质或无法解释的体重明显下降。
雅培 - T ri cor( 非诺贝特) : 2 00 4 年 FDA 批准采用纳米技术的新剂型上市特征是有/ 无进食均可服用。在本品上市前, 为了取得最佳吸收效果, 非诺贝特必须与食物同服, 非诺贝特与食物同服与单独服用时的体内吸收率相差约 35 % 。在新剂型中采用的纳米技术使药物在胃肠道内溶解的更快、 更彻底,在体内更易于吸收。
普林斯顿大学宣布正在研发一种叫做“Flash Nano Precipitation”的技术。研究小组用此技术获得了100 ~ 300n m的粒子。这种类型的粒子能使吸入剂的效果 最大化, 同时还可以进行无针头接种疫 苗。“Nano Precipitation”成功的最主要原因在于这些分子同时具有亲水性及疏水性, 而不像许多药物仅具有疏水性, 很难经由血液传输而到达目标区。
宾夕法尼亚大学的研究人员宣布 , 其正在利用柱状载体将抗肿瘤药物紫杉醇输送到肺癌动物模型中去, 该技术将比球形载体延长10倍的给药时间。该技术采用了膜圆柱状纳米粒组成的合成高分子聚合物来输送紫杉醇进入老鼠体内的人肺癌细胞中。由于该圆柱状载体能在注射后在循环中保持1 周之久, 能释 放更多的药物, 杀死更多的肿瘤细胞, 可使肿瘤大范围缩小。
我国科学家梁伟和他的团队经过两年多的努力成功发现了一种纳米尺度的 输送载体。载体就像“远程火箭”，药物就是“弹头”，经过静脉注射能够直接命中并深入肿瘤细胞。
3.2 研究前沿
固体脂质纳米粒的研究及应用
刘春喜1，张娜1*
（1.山东大学药学院，济南 250012；）
摘要
自Müller 等人首次提出固体脂质纳米粒(solid lipid nanoparticles, SLN) 以来，SLN作为一种新型的脂质药物传输载体而备受关注。SLN用生理相容性的脂质或类脂质等常用的药剂辅料制备而成，综合了其他微粒传输系统如聚合物纳米粒、脂肪乳和脂质体的种种优点，包括物理稳定性高；防止药物降解，提高药物稳定性；缓释性能好，耐受性强等等。此领域的研究表明，在最佳条件下，SLN可适用于疏水或亲水性药物的传递，从而实现最佳微粒载体系统的要求。本文将综述SLN在基因传递、蛋白多肽类药物非注射给药、难溶性药物增溶及靶向给药系统中的研究和应用。
关键词：固体脂质纳米粒；基因传递；蛋白多肽类药物非注射给药；难溶性药物增溶；靶向给药系统
Studies and applications on Solid lipid nanoparticles
LIU Chun-xi1, ZHANG Na1*
(1. School of Pharmaceutical Science, Shandong University, Ji’nan 250012, China) Abstract
Since their first description by Müller et al., solid lipid nanoparticles (SLN) have attracted increasing attention as an efficient and non-toxic alternative lipophilic colloidal drug carrier prepared with common pharmaceutical excipients such as physiological fatty substance or lipid. Solid lipid nanoparticles combine the advantages of polymeric nanoparticles, lipid emulsions and liposomes, such as physical stability, protection of incorporated labile drugs from degradation, controlled release, excellent tolerability and so on, while simultaneously avoiding their disadvantages.The research work developed in the area confirms that under optimized conditions, they can be produced to incorporate hydrophobic or hydrophilic molecules and seem to fulfill the requirements for an optimum particulate carrier system. In this article, the applications of SLN in gene delivery, non-injection system for protein and polypeptide, solubilizaion and targeted drug delivery system will be reviewed.
Key words: solid lipid nanoparticles, gene delivery, non-injection system for protein and polypeptide, solubilizaion, targeted drug delivery system
固体脂质纳米粒( solid lipid nanoparticles, SLN) 是新型的亚微粒胶体给药系统，其研究始于20 世纪90 年代[1]。SLN是一种以室温下为固态的天然或合成的脂质或类脂，如卵磷脂、作者简介:刘春喜, 女, 硕士研究生
*通讯作者: 张娜, 女, 博士, 教授, 硕士生导师 Tel:0531－88382015, E-mail:zhangnancy9@sdu.edu.cn
三酰甘油等为基质，将药物包裹于类脂核中制成粒径约为50-1000nm的固体脂质粒子给药体系。SLN主要适合于难溶性药物的包裹，用作静脉注射或局部给药，还可以作为靶向定位和控释作用的载体[2]。相对于常见的药物载体，如脂肪乳、脂质体、聚合物纳微粒等存在的热力学不稳定、毒副作用大和易被单核吞噬细胞系统所消除等问题[3]，SLN作为药物传递系统载体，具有无毒、生物相容性好、可生物降解、载药能力强、可延缓体内成分对药物的破坏、延长药物疗效、物理化学存储稳定、对靶器官有特异趋向性、成本低和利于大规模的生产等多种优点。因此，SLN又称为固体脂质体，是微乳、脂质体、聚合物纳米粒的替代品。近年来，国内外越来越多的研究人员对SLN用于药物载体所产生的良好效果产生了浓厚的兴趣，并做了大量的研究工作。本课题组也在SLN方面进行了研究，本文将对其在大分子药物如基因，多肽等以及小分子药物如抗癌新药托氟啶和抗风湿药物阿克他利的研究进行综述。
1 固体脂质纳米粒用于基因传递
作为生物大分子的载体，SLN可以用于口服、注射、肺吸入等多种途径，适合多肽与蛋白质、DNA等各类治疗药物。对于口服或肺吸入途径而言，改善纳米粒的粘膜粘附性质有助于改进有效性和延长作用时间。对于基因治疗，纳米粒不仅稳定地包合基因，防止基因的不稳定性，还能够同时包合某些导靶片断及其它辅助成分，可提高靶向性、提高基因细胞穿透性或者提高细胞内吞作用等。
基因治疗中，裸露的外源基因DNA容易被机体或细胞降解，难以实现准确的表达，因此就需要基因载体，基因治疗的成功很大程度上依赖于开发出安全高效的基因载体[6]。研究表明非病毒载体的安全性较优于病毒载体，且能够包裹较大的核酸分子，可大规模生产和无免疫原性等优点，因而研制非病毒基因载体成为重要发展方向。常用非病毒载体包括脂质体和阳离子多聚物。但二者存在的自身毒性和稳定性差极大限制了其临床应用。鉴于现有非病毒载体的不足，近年人们逐渐将目光投向了对纳米载体系统的研究。在诸多纳米基因载体中， SLN凭借其优势成为新一代具有良好发展前景的新型给药系统。基因载体的粒径和带电性质是影响其细胞毒性和转染效率的重要因素[7-8]。本课题组分别构建了阳离子型和阴离子型SLN作为基因载体，控制载体粒径以增强细胞的内吞作用，并设法调整其带电性质和带电量以降低其细胞毒性，提高最终的转染效率。
1.1 阳离子型固体脂质纳米粒
阳离子脂质体是目前较成熟的非病毒型基因载体，并且已经有多种商品化转染试剂上市
[9][5][4]。但是阳离子脂质体稳定性相对较差，与质粒DNA的相互作用难以控制，往往导致大量聚集物形成，并且体内应用时转染效果还取决于给药途径。
与阳离子脂质体相比较，阳离子SLN具备阳离子脂质体的特性，并具有更好的体内外稳定性，易于工业化大生产[10]。与其他阳离子型基因载体类似，阳离子SLN能与带负电的DNA通过静电引力结合成SLNs-DNA复合物，增加DNA稳定性，易与带负电的细胞膜结
合，促进细胞内吞，最终将DNA导入胞内[11]。本课题组首次利用杂合纳米技术向阳离子SLN体系中引入毒性小，生物相容性好的Ca。Ca能够诱导阳离子载-DNA复合物中部分缩合的DNA分子进行再缩合，从而使阳离子CTAB的用量控制在细胞可耐受范围内，从而解决了阳离子SLN由于自身电正性所引起的细胞毒性问题[12]。体外基因转染实验表明，阳离子SLN能够将绿色荧光蛋白基因成功递送到细胞内，虽在24h内的表达效率较lipofectamine低，但随着时间延长，到48h时表达绿色荧光强度增强，与商品化阳离子脂质体24h转染效果相当，证明了阳离子SLN用作基因递送载体的可行性(如图1所示)。
1.2 阴离子型载基因三元复合纳米粒
本课题组构建的阳离子SLN/ DNA复合物由于正电性限于肺部等局部给药方式，不适合静脉注射给药，因此我们制备阴离子型SLN，以期克服阳离子载体的上述不足。
利用FDA已批准可供临床使用的鱼精蛋白（protamine）作为聚阳离子对DNA进行缩合，不仅能使DNA伸展的长链得以压缩，提高其抵抗剧烈外力的能力[13]，且鱼精蛋白还可作为核定位信号促进内吞体逃逸，增强基因的体内外转染效率[14]2+2+，然后将该复合物包裹于SLN，制得载鱼精蛋白-DNA复合物的SLN，包封率高达86.5±5.28%，其独特的“核－壳”结构以及鱼精蛋白与DNA紧密结合致使DNA释放缓慢，具有明显长效缓释能力[15]。在此基础上，我们以制备阴离子型载基因SLN为目的，设计三元复合荷DNA纳米粒[16]。
选用粒径在150-200nm的鱼精蛋白-DNA二元复合物作为内核支撑，20nm小粒径阴离子型SLN作为可吸附物，分子自组装制备阴离子型荷基因三元纳米复合物（图2）。体外转染实验结果（图3）显示，48h的转染量接近Lipofectamine组，并明显高于二元复合物组。
三元复合纳米粒在综合了包封型SLN优点同时，具有更明显的穿越生理屏障的功能优势：①由于外层SLN和鱼精蛋白－pDNA二元复合物内核的粒径能够被严格控制，因此三元复合纳米粒的粒径大小更适合于细胞内吞；②外层SLN通过静电作用吸附于内核表面，其作用力较弱，在内吞体酸性环境下易于分离，从而顺利释放内核；③随着外层吸附物的剥离，内核中存在的强阳正电荷促使内吞体逃逸，进入胞浆；④鱼精蛋白的核定位能力发挥作用，促进携带基因进入细胞核，并表达目的蛋白。本课题组构建的阴离子型载基因三元复合纳米粒是对阴离子型SLN作为基因载体研究的完善和补充，拓展了该类载体在基因转染方面的应用，其相关研究在国内外尚未见报道。
图1不同载体携带pEGFP在COS-7细胞中体外转染结果
Fig1. Gene transfection of pEGFP in COS-7 cells(×400)(A) (B): The transfection results in 24h and 48h of naked DNA; (C) (D): The transfection results in 24h and 48h of Lipofectamine; (E) (F): The transfection results in 24h and 48h of SLNs-pDNA
图2 三元复合纳米粒示意图
Fig2. Scheme of anionic ternary nanoparticles
图3不同基因载体携带质粒pEGFP基因在A549细胞中的表达情况(×200)。基因表达时间分别为24h和48h。
Fig.3 Fluorescent microscopy of A549 cells transfected by plasmid encoding enhanced green fluorescence protein (EGFP) with different carriers. Gene expression was examined after 24 h and 48 h post transfection, respectively.
2 固体脂质纳米粒用于多肽和蛋白质类药物非注射给药系统
2.1 口服给药系统
开发多肽和蛋白质类药物的口服给药系统成为世界各国多领域科学家积极研究的主要方向之一[17-19]。研究发现微粒给药系统的组成及结构，对于多肽的吸收起着非常重要的作用。SLN用于口服给药，可以控制药物在胃肠道内的释放，并可保护多肽药物免受降解，增加药物的生物利用度[20-21]。胰岛素作为Ⅰ型糖尿病的一线降糖药物，口服易在胃肠道降解，且难以通过生物膜吸收，通常以注射方式给药[22]。胰岛素的纳米粒化技术给药，旨在提高药物的稳定性，增加非注射给药的生物利用度，实现药物的体内缓释[23]、长效[24]，解决长期连续注射造成患者顺应性差的问题。
本课题组制备包载胰岛素的SLN(Insulin-SLNs)，并利用可特异性识别细胞膜糖脂或糖蛋白糖链上不同糖基的麦胚凝集素(WGA)作为定位因子，对Insulin-SLNs进行修饰，促进胰岛素的口服吸收。小鼠和大鼠灌胃给予SLNs实验结果表明Insulin-SLNs能够促进胰岛素的口服吸收，具有一定的降血糖效果。而WGA 修饰显著促进了胰岛素吸收，证实了凝集素的靶向作用和吸收促进作用。但其相对生物利用度仍较低，WGA 修饰SLNs 作为生物大分子药物口服给药系统尚需进一步研究。
第1篇：打造童装品牌策划书
打造童装品牌文化应先行
从“千禧宝宝”、“金猪宝宝”到即将到来的“奥运宝宝”，婴儿出生热潮来势汹汹，
打造童装品牌策划书（一）。年轻的爸爸妈妈对宝宝们投入了更多的关爱，对儿童服装的人性化设计也有了更高的要求——在以前的实惠、舒适的基础上应更趋于时尚、个性，富有内涵。“婴儿潮”为我国童装产业提供了良好的发展机遇。可是，尽管在款式、色彩、样式等方面多种多样，我国童装却普遍缺乏文化内涵。童装作为一种文化载体，对儿童的身心健康有着潜移默化的影响，特别对儿童的早期教育有着特定的辅助作用。要想打造一个成功的童装品牌，文化建设势在必行。
品牌名称展现企业文化品牌的文化内涵是提升品牌附加值和产品竞争力的原动力，而名称是品牌文化的重要组成部分和企业的无形资产。一个好的名称应该便于记忆，使人产生联想，引发好感，从而促进购买。可以说，品牌的文化内涵是以某种形式存在于它的名称之中的。
品牌的文化品位，并不仅仅只是体现在产品名称的“美”上，而是受众所能理解、并能在此基础上产生丰富的文化联想。例如童装品牌“十二喜”，就充分借助中国文化12的吉祥寓意，将十二生肖、十二星座、十二轮回的吉祥寓意，与当代儿童的健康成长精妙融合，传导出温馨备至的贴身感受，形成内涵的完美塑造。无须更多的解释，第一时间产生最清晰的印象，第一时间传导出最明确的意图，第一时间与竞争者拉开明显距离，第一时间抓住众人的眼光。
卡通形象促进文化传播无论是中国的动画形象蓝猫，还是来自外国的卡通片米老鼠和唐老鸭，儿童都是其主要目标受众群体。从商业运作上讲，在服装上运用卡通图案是一种很有效的营销手段。运用卡通人物、漫画形象的童装设计风格，一方面利用了动画片对于儿童的强大影响力，另一方面反过来又促进了动画产业的发展。
之所以一些卡通形象能够在童装这样一个载体中再次迸发出商业价值，是因为其赋予了童装一种生命。所谓的“生命”，就是指在卡通中有着丰富性格特征的，鲜活的卡通人物。他们有着极其相似的性格共性，那就是善良、勇敢、重视朋友，选择正义等等，这很显然体现了人们对真、善、美的呼唤。卡通形象放在童装设计上，是对儿童明辩是非的一种引导，也是对企业文化理念的一种传播。
有人说，未来的企业竞争是品牌的竞争，更是品牌文化之间的竞争。一个成功的品牌应该是品质与文化的有机结合。由此看来，将无形的文化价值转化为有形的品牌价值，把文化财富转化为企业竞争的资本，是品牌文化建设的终极目的。作为服装产业未来新的增长点，童装企业应将品牌文化的建设作为自己发展战略的重要部分，这样才能在激烈的市场竞争中取得先人一步的独特优势
既然是童服，就一定要体现出目标消费者的文化与个性，就更应该注重品牌的文化内涵以及长期的品牌资产的积累，消费者才能真正地消费我们的品牌，而不仅仅是一件产品，然而，事实并不如我们想象得那么简单……
笔者也经常在周六周日休息的时候，去店逛逛，一来是休闲一下，二来也可以看看最新的流行文化。然而，每次逛回来，都有一点点失望。在大部分的童服店，除了降价打折等拼命销售外，真正能让消费者体验其品牌文化的店面真是少之又少！就连行业内认为非常知名的几个童服品牌，也没有完全体现出自己的独特的文化个性！甚至我在店门口仔细观察，细细品味，也不得其要领！
当然，中国服装企业起步较晚，而真正形成品牌热潮也才是近些年的事儿。很多服装企业，已经开始意识到的品牌问题。企业做大了，要迈上新的台阶，仅*当初创业的方法，已力不从心！然而，纵观整个服装行业的现状我们不难发现，大家在操作服装品牌时，有很多地方都不够专业，甚至有很多已经有一定规模与基础的企业，还在延用创业初期的“画册+模特”的品牌运营模式，结果还是跳入千牌一面的同质化境地当中。正如前几天一位服装老板来找我时所言，钱花了不少，也想把品牌做好，可就是不见成效，业绩一年比一年难以提升。没错，对于众多童服装品牌而言，要想业绩迅速提升，拉开与竞争品牌的距离，就必需越过“品牌”这道坎！
也有一些服装企业的老板来找我，对我说：我们广告也做了，钱也花了，甚至来明星也请了，怎么还不见效果？这是很多企业老板困惑的地方。基于笔者对服装行业的分析与了解，我们发现，很多企业自以为是在做品牌，请明星，打广告，做画册，搞宣传。其实，这些只是打造品牌的非常战术的一个层面，很少有企业对品牌有长远系统的规划。我们称之为从企业出发的自我品牌————虚拟品牌，再深入分析亦不难发现，虚拟品牌运作，有八大陷阱，正对目前的童服品牌产生着毁灭性的破坏，一旦跳不出这个怪圈，即使再有规模的企业，都有可能在未来的两三年内，失去竞争力……
第2篇：品牌策划书近年来，国内液态奶市场主要以牛奶为主，其市场竞争激烈程度已经进入白日化，虽然随着消费水平的提高，液态奶制品的需求量在剧增，但是整个市场已接近饱和，并且几经洗牌，在国内也形成了以“伊利”、“蒙牛”、“三鹿”等大品牌割据整体市场的局面，欲闯阵液态奶制品市场，并在短期内迅速作大作强，的确不是一件易事。
山东某集团公司欲试水液态奶制品行业，笔者与此集团公司决策层和国内知名乳制品专家进行几次密会论坛，经过几翻深入的沟通与探讨之后，最后笔者提议：避开液态乳制品（牛奶）的正面竞争，另劈新径，从“植物蛋白”入手，全新打造新一代的植物蛋白营养饮品。
挖掘：“植物黄金”，进行品类创新
如今，随着生活水平的提高，人们越来越注重营养、健康，因此很多人每天都会喝牛奶，目的就是为了增强体质。牛奶主要满足人体对蛋白质及钙等营养的需求，但它是一种“动物蛋白”，很多人担心发胖，或者因为身体机能的原因，不喜欢或是不能适应牛奶（即：乳糖不耐症等），这就形成了另一种市场需求。此外，随着人们生活水平的提高，“素食主义者”已经逐渐发展成为一个不可小视的群体，而这部分人群中有不少是有一定社会基础、物质生活比较优越的成功人士；我们研发的“素奶”采用国外优质大豆分离蛋白调配而成，其富含人体必需但无法自身合成的多种氨基酸、维生素和微量元素，不含胆固醇、动物脂肪和乳糖，是一种集营养、美味于一体的新型高植物蛋白营养饮品，正好迎合了这种需求。
我们把这种“植物黄金”定位为高端产品，为了给于消费者一个充分的消费理由，我们给这种新品类命名为“a素奶”。接下来，我们进行了消费者定位、产品线规划和渠道定位。
1、a素奶目标消费群定位：经过几个月的缜密市场调研与spss统计分析，我们将目标消费者定位为：①。18—45岁白领、时尚女性以及目前消费蛋白质粉的顾客；②大、中城市
退休的中老年人有保健意识的大众人士。
2、a素奶产品线规划：形象产品——-利乐钻装；利润产品——-利乐砖和利乐枕装；走量产品——-百利包装三大梯队阵容，全面上市。
3、a素奶主要销售渠道定位：
以大\中型商超、量贩店、星级酒店等为主要渠道；以高档社区流通渠道有效店为辅助渠道。
实效营销：进行液态奶市场切割
上市策略：
1、渠道互动，提高品牌竞争力
在新产品上市的实际执行中，总是出现广告和终端出样脱节的现象。不论你是怎样的品牌，不论你有怎样的广告轰炸，如果没有终端的支撑、没有消费者，产品再好、品牌再大也难产生良好的销售业绩。
根据各区域商超、餐饮渠道的特性及市场状况，我们采取渠道互动的策略。a素奶产品上市后，充分利用品牌形象表现系统，采用主题户外广告、海报、kd板、易拉宝等广宣品来做为该各渠道广告打击的主要工具。所有的广宣物料都传达着同一个主题形象。
在市场启动期采取以“铺货与广告同步”及“在终端培育销售热点”两种策略，制造良好的销售氛围，凸显品牌的魅力，并形成良好的口碑传播效应。
2、确定重点、兼顾一般，建立局部优势
在区域市场内确定重点市场和一般市场，围绕2：8原则，对每个区域内的终端点进行明确划分，紧紧结合经销商的当地资源，集中有限支持费用，分阶段、分步骤对重点市场进行投入，形成市场的局部优势，在短时间内起到提升销量，在辖区内迅速建立样板店及样板市场的作用。
推广策略
1、实效性公关活动
举办多种大型a素奶研讨会，并配合研讨会的会议主题，以权威人士的认可及口碑，传播“a素奶”全新概念，在新闻界形成链条式效应，引起媒体、公众关注，形成新时期健康消费新趋势的热点快速传播，从而引导“新健康消费”。
2、实效性媒体广告宣传
在逐步完善各级市场的网络建设工作后，在重点市场的大型煤体强势开展对品牌形象的宣传和产品概念性的输出，强势引领健康消费新趋势。
3、实效性促销推广活动
紧扣各级有效终端，强占终端的制高点，迅速树立样板店，使终端形成良好的销售回转，产生良好的品牌效应，同时辐射周边的其他终端，配合区域市场的局部优势形成以线至点，再连线，分阶段扩张织网成面的战略规划。在不同时期针对经销商、终端、消费者等开展不同的促销活动。
结束语：一个全新的品牌正在崛起。
第3篇：“菜根谭酒”品牌营销推广策划方案我国白酒业无论是在规模上，还是在产品产量及企业数量上，都可称之为"世界之最"。白酒作为我国特有的、具有悠久历史的传统酒种，在世界烈性酒类产品中散发着熠熠光彩，在消费者的心目中占有十分重要的地位。我国有五千年的文明史，就有了五千年的酒文化。婚丧嫁娶、佳节喜庆、朋友小聚、拜访亲友，都要以酒为敬，以酒为贺。酒在溶入人们日常饮食生
活的同时，酒文化也在人们的观念中根深蒂固。随着人们生活水平的提高，人们在饮食方面更加注重营养和科学，更加讲究品位和个性。在盲目消费被理性消费所取代的今天受众，白酒业也从普通市民到社会高层，从小型城市到大中城市，从丰富餐桌到精品馈赠，具有着更深远和难以割舍的民族意义和文化意义。
*微观环境：
面对众多的白酒品牌充斥的酒类市场，消费者在选购时变得不再盲目，许多人留意产品本身所能为他们提供的实际需要的同时，逐渐开始注意品牌的精神需要。因此，注重品牌经营的同时，拥有一个实际而个性的销售主张，是扩大和提升终端销售力量的获胜法宝，也是白酒生产企业未来发展的战略重点。
机会分析：
“菜根谭”白酒品牌的优势：
a、以特色文化作后盾；
b、走特色营销的路子；
c、品牌的亲和力；
d、包装具有特色；
e、整合资源
f、谋划深远
营销策略
侧翼奇袭
我们的核心思维是以量取胜，在量的基础上占控商脉，抢占终端致高点。先赚取应得的利润空间，尽快回收运作成本，再做品牌！所以我们决定在小瓶酒上做大文章，打破市场缺口，侧翼奇袭！
任何企业都需要利润来支撑日常运作，所以先做销量，再做品牌的指导思想绝对正确！主推核心商品金装菜根谭酒和银装菜根谭酒，以促销来做量，薄利多销，如果能把量做大，那么利润跑不了！稳步经营，稳中求胜，一步一个脚印的拓展市场。
画龙点睛。
二十几个超大型的商场、超市、量贩、购物广场上市期间采用捆绑销售的方式，买二送一，配合海报、POP、排面或端架，场内应派综合素质和技术经验丰富、靓丽、表达能力好的促销小姐各一名，现场引导，诱发购买！场外举行免费试饮，派发相关宣传资料和介绍商品特色。
吞云吐雾。
把其余40几个中型卖场全部上市，不给予任何海报费、POP费、排面、端架方面的费用，只同意做变价促销给予配合！特价期为15天，当然，第一步运作成功，第二步方能创造效益。
飞龙在天。
成立公关小组，专门和各大商场、超市、量贩、购物广场的柜组长、营业经理、店长、采购人员沟通、交流。长期为我们上海报、POP、排面、端架等支持、配合我们的推广计划！如果不同意支持的卖场，一律不给予变价促销支持，很简单，老百姓的酒，谁都买得起，不愁销量，不需担心销售问题。
龙卷残云。
孙子说：兵者，势也，善作势者胜。加强终端维护、管理以及售后服务，做到不断货、库存适量，陈列位置理想，POP整齐严谨。最重要的一点，必须让所有的商超都在炒作菜根谭。
分步骤主动降价法
1、主要思路：
A、导入期采用高价格、高促销进行现金铺市，快速启动市场。
B、明、暗返利相结合来应对冲货，不跟风降价，赢得产品进入成长期的时间。
C、分阶段主动降价，降低冲货风险，赢得分销商的信任，加快产品进入成熟期。
2、具体运作：
A、铺市阶段：（10天）：*元/箱现金铺市，每箱奖励5元礼品如小雨伞，主要铺便民店、商超终端，。
B、第二阶段（1个月）：供便民店*元/箱，买十送一加暗返（除去赠酒政策，净价格在*元/箱）。此阶段后期菜根谭酒市场已初步启动，市场由导入期进入成长期，个别二批开始从郑州*元/箱冲货，对便民店终端价供在*元左右，但我们告诉便民店、商超老板加上暗返我们的价格肯定会比冲货低，让他们安心销售。
C、第三阶段（1个月）：取消买十送一政策，价格主动降为*元/箱，另外每箱*元另外返利，并继续承诺有暗的返利。此阶段倒货二批跟随我们的价格市场价格降为*元/件，但由于便民店老板对我们建立了充分的信任，价格稳定，销量平稳上升。
D、第四阶段（1个月）：兑现前期返利，并按每箱2元兑现前期暗返，价格主动降为*元/箱，取消返利但继续承诺暗返。
E、第五阶段：经过前四个阶段，菜根谭酒已基本进入成熟期，市场已有很大的销量，这时春节已临近，我们召开了菜根谭酒（包括菜根谭酒厂其他系列产品）供货会提前压货，会上我们按2元/瓶兑现菜根谭酒前期所有暗返，并在当天会议上推出了买十送一的政策，不再暗返。
F、第六阶段（春节后）：由于市场进入了衰退期，我们取消买十送一活动，价格降为*元/箱，加大便民店、超市老板的利润，提高其积极性，经销商不再进行任何促销，任其自然消化。
菜根谭酒的“331营销模式”。
“331营销模式”中的“3”代表“三大工程”，即针对酒店终端的“101工程”——平均每10家酒店由厂方派驻一个专职业务员，负责日常礼品兑换、客情维护、售后服务、产品形象展示等工作，同时在A类店设置品牌推广代表，重点加强与店方的沟通交流工作；针对流通终端的“金网工程”——重点服务对象是与分销商签约的二批商及其下面的小二批、小商超，
主要目的是让厂家的市场支持力度传递执行到位；大型商场超市工程——选定1/10重点超市，全年至少上堆头3个月。
“331营销模式”中的“3”代表每年中秋节、国庆节和春节针对流通市场，分别开展一次促销活动，保证促销力度不低于同档次竞品的促销规模。
“331营销模式”中的“1”代表1个活动，即宴席用菜根谭酒活动。依据事实消费的原则，凡是在各类宴席中饮用菜根谭酒的，不论通过何种渠道购买的，都有香烟、可乐、手机、冰箱等礼品现场抽取。
金网工程
331营销模式的精髓就在于开展“金网工程”。
金网工程服务的对象是一级经销商下面的二批经销商、小二批、小型商超，是位于分销商之前的二批下属销售网络，
金网工程的目的主要在于：
1、建立流通领域的终端网络。金网工程的目的不是在于想多卖几瓶酒，而是在流通领域建立健全的终端网络，通过终端维护再把这个网络不断的完善。
2、有利于厂方加强对流通领域的管理和维护工作。331营销模式体现的两个原则是厂方对经销商职责分开，厂方该干什么，经销商该干什么。建立流通网络的目的就是有一个网络能够让厂商双方共同去执行赋予的职责。
3、有利于厂方在流通领域、网络终端定期与不定期的开展促销活动和品牌推广活动。331营销模式的目的是要把菜根谭做成十堰地区的强势品牌，通过金网工程，每次的市场计划和活动就能编进不同的网点，促销方面就有了一个量化的概念。这是建设金网工程的重要性和必要性。
酒店终端策略
酒店终端是白酒商家必争之地，酒店促销伴随着商家短兵相接的竞争愈演愈烈。市场表明，酒店促销策略开始不断特色化和细分化，酒店的档次、地段、节日氛围、消费环境等客观的方面都得到了很多一线人员的注意，但是他们却常常忽视了对酒店终端三类人群的细分。
一、主流酒店老板
促销目的：
白酒，尤其是中高端，其消费主要集中在酒店终端。酒店老板在白酒销售环节上充当的角色至关重要。白酒要进入酒店，除了给予酒店一笔数额巨大的进场费外，还必须要针对酒店老板开展促销，只有这样，一方面可以通过酒店老板直接向消费者推销产品，另一方面能够保证产品在酒店开展的活动能正常进行。
促销手段：
白酒上市铺货离不开惯用的销售返点政策。对于盘中盘操作的白酒产品来说，产品上市时期直接以返点的方式，给予酒店老板直接利益，激发酒店老板积极性推销白酒新产品。主要以铺货返利和销售返点两种常用方式，满足酒店老板的心理期望值。
铺货返利政策。在新产品上市前一至两个月，凡一次性进货2箱的酒店，赠送一或两瓶新产品白酒，以此类推。或同时附带赠送精美烟具、酒具和茶具等。另外对于销售返点政策也可以制定4～6的返点比率，直接以该白酒作为返利，酒店每月和业务员直接结算，快速有效激发酒店老板积极性。
对于新产品来说，产品上市后期仍然需要较好的促销延伸销售曲线，比如旅游促销这种方式就比较适合在产品上市后期推出，对产品销售达到一定量的酒店，定期组织酒店老板外出旅游，为参加企业准备酒店管理、员工管理等相关培训。
二、酒店促销员或服务员
促销目的：
白酒完成销售过程的最后一个环节，就是酒店促销员或服务员将产品成功推荐给消费者，这是产品销售尤其是白酒产品实现销售工作的最重要的一个环节，也是最后的“临门一脚”。那么，如何激发酒店促销员或服务员推销产品的积极性，无疑就成为各白酒厂家最为关心的问题。
白酒新产品的专职促销员也是产品品牌的载体，她们偕同白酒产品一同在终端出现，对产品的销售具有很强的推动力。同时具有良好形象和促销技巧的专职促销员，还可以在很大程度上支撑品牌的口碑宣传，提升产品品牌的消费形象度，有效拉近产品和消费者之间的距离。
促销手段：
对于白酒新品而言，在特定上市时期率先突破特定酒店（非连锁性大店以及管理不太规范的酒店），能够快速激发酒店终端氛围，激活区域市场。通过一系列的调研分析，我们发现一个开发酒店促销员或服务员积极性最为有效的策略手段———设置开瓶费。主要是通过在每瓶酒内设置一个特定的身份验证号码，酒店促销员或服务员凭借这个独一无二的号码和厂家（或经销商）直接兑换现金。同时对不同的产品档次进行细分，比如高档礼品装每瓶可兑奖20～30元；主销产品每瓶兑奖8～15元；中低档每瓶设置5元。对于专职促销员促销，也可以根据产品的档次予以提成。该方案优点是促销员能及时得到实惠，有效提高其积极性；但其缺点是如果酒店老板一旦发现，活动便很难继续开展。
促销策略：
文化性促销。招聘仪表端庄、得体、形象佳、语言表达流利的年轻女性专职促销员，并为她们从整体设计简洁不失其秀气的统一服装，风格要与产品品牌风格相一致，让她们熟悉促销产品品质及品牌内涵，尤其是产品包装所内涵的酒文化，让她们在推荐产品的时候传播其内在的文化内涵。
娱乐化促销。在酒店由专职促销员组织一些具有娱乐性的节目，比如在酒店设置卡拉ok卡座，凡是饮用菜根谭的消费者都可以挑选专职促销员唱歌，或
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