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成 都 理 工 大 学
学生毕业设计（论文）外文译文
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基于氢氧化镍和电还原石墨烯氧化物高度敏感的非酶葡萄糖和双氧
水传感器——多壁碳纳米管膜修饰玻碳电极
WeiGao a, WengWeeiTjiub , JunchaoWeia , TianxiLiua，※
a 中国，上海，复旦大学，高分子科学，聚合物分子工程，State
b 新加坡，117602 重点实验室 邮编200433 材料与工程研究所A*STAR (Agency for Science, Technology and Research),
文章信息：
文章历史：2013年9月5日接收; 2013年12月3日收到修改稿; 2013年12月5日接受；2013年12月27日可在网上浏览。
关键词：石墨烯 多壁碳纳米管 氢氧化镍 葡萄糖传感器 双氧水传感器
摘要： 在这篇文章中，基于氢氧化镍和电还原石墨氧化物（简称ERGO）—多壁碳纳米管（简称MWNT）纳米复合材料是通过氢氧化镍纳米粒子在碳纳米管电还原石墨氧化物的膜修饰玻碳电极的电极位置上方便的制备得到。氧化石墨烯（简称GO）片可以作为表面活性剂来稳定水溶液中的原始多壁碳纳米管的分散性，在制造过程中GCE上，呈现对ERGO-碳纳米管薄膜的优良覆盖性。多壁碳纳米管作为ERGO片之间的导电桥梁，以提高在基板上的电子传输速率。通过结合ERGO和多壁碳纳米管的优点，用氢氧化镍的电催化效应共同的纳米颗粒，在设计良好的纳米复合材料对葡萄糖和 过氧化氢显示出优异的传感行为。葡萄糖和过氧化氢的线性检测范围是10-1500微米和10-
9050微米，而检测限分别为2.7微米和4.0微米。此外，在2024微安每摩尔每平方厘米浓度时对葡萄糖有非常高的灵敏度，在711微安每摩尔每平方厘米时对双氧水灵敏度高。这些结果表明，氢氧化镍-ERGO-MWNT作为一种有前途的电极材料生物传感器很容易地通过一个绿色的电化学方法制备得到。此外，分析物的良好的回收率，在实际应用中如尿液和牛奶实际样品中证实了所制备的传感器的可靠性 。
1引言
纳米碳材料来到电化学生物传感领域的前沿，因为其卓越的物理性能和显着的导电性[1]。由于其优异的电子传输功能，高纵横比和化学稳定性[5]，在作为电极改性剂测定各种分析物时，一维（1D）的碳纳米管已经获得了很大的关注度[2-4]，石墨烯是一种碳原子具有优良的物理化学性能的一个明确的二维（2D）的晶格结构，也算是一个杰出的非酶生物传感催化剂载体[6,7]。石墨烯氧化物（GO），石墨烯的氧化形式，通过将石墨与强氧化剂，含有多个芳香区域和亲水性含氧官能团，可以通过形成便利的未分散的原始多壁碳纳米管（MWNTs）在水溶液中的悬浮液得到的GO-通过强有力的π-π相互作用多壁碳纳米管复合物[8-10]。GO-碳纳米管复合物的悬浮液以及可处理的电极结构的制作[11]。此外，尽管在相异的结构，减小的GO（RGO）示出类似的多壁碳纳米管，从而形成的非共价RGO-碳纳米管复合物大概有协同作用，能作为开发新型碳纳米材料具有潜在提高的导电性和催化效应电化学研究[12]。王，等人已经报告了氢 合成PtAu双金属纳米粒子的过氧化氢（H2O2）传感器 上通过一步法共同还原石墨烯的碳纳米管复合物 方法[13]。 Chu等人，报告RGO/单壁碳纳米管（SWNT）纳米复合材料作为改性剂对玻璃碳电极（GCE）用于对过氧化氢生化传感和β-烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NADH）[14]。糖尿病常见的慢性疾病，正在成为一个巨大的威胁 人类现在的健康状况。许多可靠和高效方法已被开发来监测葡萄糖在人体血液中并用于临床检测和治疗。尽管良好的选择性和高灵敏度可与固定化的酶的葡萄糖传感器来获得，该缺点源于酶的固有特性，例如热或化学稳定性大大阻碍了它们的实际应用[15]。因此基于金属及其衍生物非酶传感器， 如Cu[16]，氢氧化镍[17]和二氧化
锰[18]被广泛研究，以克服这些缺点。过氧化氢，葡萄糖氧化的葡萄糖氧化酶和氧[19]的定量见此，以及广泛应用于食品，临床，环境和制药领域的重要化合物存在的产物，也吸引越来越多的关注 [20]。 据报道，像那些基于贵金属如Ag[21]的多样性，金[22]，过氧化氢传感器具有良好的电催化活性。 在所有这些成本相对较低的材料，对于葡萄糖和过氧化氢，乙醇中，镍基纳米复合材料显示出高电化学性能的传感器。在检测中，氧化物（NiOOH）趋于形成碱性介质，并形成进一步催化分析物[26]的氧化过程。这些装饰镍衍生物作为孤立的纳米颗粒或纳米结构与基板上不同的形态提供了一个流行的战略，以发展高效电传感器。金属催化剂的协同效应和他们的生长，可能会增强的检测性能。 在这份报告中，我们提出了一个新的，方便的策略制造三元的氢氧化镍电还原的石墨烯氧化物 （ERGO—多壁碳纳米管纳米复合材料的葡萄糖和过氧化氢的检测。ERGO-碳纳米管混合薄膜是由改性下降GCE上的暂停在良好分散性好，多壁碳纳米管复合物电极表面。在下面的步骤中，电还原进行的绿色和快速的方法去转换成ERGO而不降低材料[27]任何污染，具有很高的纵横比原始多壁碳纳米管促进这一过程[28]。氢氧化镍纳米粒子通过一个简单的生长在ERGO-碳纳米管基板电沉积法。 ERGO的协同效果，并多壁碳纳米管使得混合膜独特的电支持用于生长或形成的氢氧化镍纳米颗粒。这样制成的传感器演示了一个显着的非酶传感 对葡萄糖和过氧化氢，具有灵敏度高，大行为线性范围宽，响应时间短和低检测限。
2．实验
2.1试剂和材料
天然石墨粉末（325目）从Alfa Aesar购买。多壁碳纳米管（长度，10-30微米，外直径20-30纳米;纯度 ，95％）是由成都有机化学研究所提供。98％硫酸，硝酸钾，高锰酸钾，硝酸钠，氯化钠，氢氧化钠，盐酸，N，N-二甲基甲酰胺（DMF），葡萄糖，果糖，半乳糖和抗坏血酸（AA）的
国药集团化学试剂有限公司获得。尿酸（UA，98％）从百灵威科技有限公司获得。六水氯化镍是购自Aldrich公司。磷酸盐缓冲溶液（PBS，pH值为7, 浓度0.2 M）的制备通过混合标准溶液磷酸氢二钠和磷酸二氢钠。整个实验中，过氧化氢稀溶液是每天现准备的，去离子（DI）水也是每天都用新的。
2.2 Ni(OH)2/ERGO–MWNT/GCE的制备
整个实验的策略的提出在方案1。氧化石墨是根据上百次的改进方法制备。得到的产物在去离子水中超声处理1小时。然后石墨烯氧化物的悬浮液所用浇注到他们多壁碳纳米管团块与另一超声处理1小时，以分散原始的多壁碳纳米管。制备的GO-MWNT复合物具有不同的GO / MWNT的重量比（1/1，2/1和4/1）的悬浮液并直接用于修改的电极。所有悬浮液保持在2毫克/毫升的浓度恒定。在使用之前，在使用之前，裸玻碳电极（直径3毫米），在1.0，0.3和0.05微米的氧化铝浆料中抛光处理，然后在1：1乙醇/水的溶液超声15分钟以除去残留的氧化铝，最后在氮气流中干燥。GO-MWNT薄膜涂布在GCE通过在电极表面上滴加5μL的GO-MWNT悬浮液，随后在硅胶干燥器中干燥。然后，在电化学工作站上在0.2M的PBS溶液中进行GO-MWNT/GCE的还原，循环电压电势范围是0到1.5V，扫描速率为100 m V s-1。然后氢氧化镍纳米颗粒在恒定电位为1.1V下15秒且ERGO–MWNT/GCE在10毫摩尔的镍离子进行电沉积。[29]
为了进行比较Ni(OH)2/ERGO/GCE 和 Ni(OH)2/MWNT/GCE通过同样的程序也制造除了纯 GO悬浮或分散在DMF原始多壁碳纳米管被用作 修饰GCE上的氢氧化镍的电沉积。Ni(OH)2/GCE 的制备可以通过直接在裸玻碳电极上对氢氧化镍进行电沉积。
2.3 测量和仪器
所有的电化学测量都在一个CHI660D电化学工作站上进行。三电极系统，用于整个用修饰电极为工作电极的实验，铂丝为辅助电极，并且将Ag/ AgCl电极（3M KCl）中的电极作为参考电极。所有【成都论文翻译】
的这些电化学测量都在室温下进行。拉曼光谱在JobinYvon LabRam-1B进行，拉曼光谱仪的激发波长为632.8nm。扫描电子显微镜（SEM）是用JEOL JSM-7600F加上一种能量色散型X射线（EDX）检测器进行的。SEM观察之前，将样品的表面均覆盖上金。
3 结果与讨论
3.1GO-MWNT复合物的表征
图1a中清楚地表明，原始MWNT团块只是聚集在水溶液和沉淀到容器的底部。与此相反，GO，由于附着在平面上的亲水性基团，可以很好地分散并形成棕黄色胶状悬浮液。然而，混有GO，并当原始多壁碳纳米管分别以1/4的重量比和超声处理后，纯净的碳纳米管可以成功中止GO薄片和形成均匀的黑色悬浮液。TEM显微图。图1b示出了，GO薄片的表面用多壁碳纳米管布满，说明由于GO和碳纳米管之间的强的π-π堆积相互作用形成的GO-MWNT复合物。并且多壁碳纳米管的含量不会导致严重复杂的聚集。
多壁碳纳米管的拉曼光谱，GO和GO-碳纳米管复合物示于图2。所有的拉曼光谱显示出两条带，G带和D带。D带是与SP3的存在缺陷，而G带是与面内振动SP2碳原子数[30]。可以看出，相对强度比对GO-MWNT复合物（IG/ ID），比纯的GO更高，表示引入的原始多壁碳纳米管的成配合物已降低SP3缺陷的相对含量，这也是有利于电子的转移。
3.2. Ni(OH)2/ERGO–MWNT/GCE的电化学合成
当GO-MWNT复合物的悬浮液中滴加干燥的电极和真空的表面上，在GCE形成均匀的膜。图3a 显示的GO-MWNT薄膜的循环伏安修饰电极(CVs)在电位范围从0到1.5伏，50个循环。在第一周期中，在-1.27伏的强阴极电流峰与-0.83伏的起始电势被观察到的，由于自水与氢的还原附着在GO表面的含氧官能团的还原发生在一个更负的电势（例如，1.5 V）。在下面的循环中，还原峰减小并最终消失，而曲线趋于稳定，这表明GO的电还原发生不可逆转和氧化物质被消除[27]。以这种方式，修改于GCE GO-碳纳米管膜被改变或减少到ERGO-碳纳米管薄膜具有更好的稳定性和增强的电子转移性。氢氧化镍的电沉积过程随电流（I） - 时间（t）曲线的中图示于图3b中。在接下来的时间里，在电极的一个表面上满足恒定电流对应于一个恒定[OH]通量[17]。
3.3. Ni(OH)2/ERGO–MWNT纳米复合材料的结构和形态
电极改性剂的表面形貌正在进一步研究。图. 4(a,b) 显示GO-碳纳米管混合的SEM图膜形成在ITO玻璃。仔细检查表明，在薄膜表面显示GO薄片褶皱的特征，与典型的筒状碳纳米管的特性共存。这里，GO起着分散剂的作用，使表面平滑，并且延缓或抑制多壁碳纳米管的聚合[14]。多壁碳纳米管随机穿插在GO表面及缠绕与中彼此以形成均匀的三维（3D）网络。多壁碳纳米管的插入或在GO表面上的MWNT通过π-π相互作用的吸附（参见图1b）大大防止了GO薄片本身的堆积，从而导致更大的表面积。然而如图4（c，d）所示对于氢氧化镍/ERGO-MWNT改性后的纳米复合膜修饰在ITO上，证明一个粗糙的表面是在PBS中经过电解还原处理获得的和氢氧化镍纳米粒子的随后的电化学沉积，而ERGO-碳纳米管基板的特征依然明显。EDX结果（图4e，f）证明了淀积的氢氧化镍纳米颗粒具有均匀分布的碳质基材具有非常小的尺寸，并没有发现明显的聚集现象。
3.4对实验结果的优化
为了优化电化学性能，氢氧化镍纳米粒子在ERGO–MWNT基板上发生电沉积，用不同的初始GO/MWNT重量比（4/1，2/1，1/1）通过在碱性介质中相同的程序及其电化学行为进行了研究。如图S1所示的CV曲线图表明基于与4/1的GO / MWNT的重量比配合物的纳米复合材料，与氢氧化镍在单独的纯ERGO沉积相比，被发现在增强基本电流时呈现在0.1M氢氧化钠溶液中最强的氧化还
原峰，与此重量相比这意味着它拥有在电极修饰最好的电化学性能。多壁碳纳米管可以通过构建导电桥，以提高分离ERGO表之间的阻碍电荷传输功能，导致改进的电化学性能，以及在3D复合物的更大的电活性表面区域。然而，进一步增加了复杂的多壁碳纳米管的含量可能会导致聚合并且混合膜的凹凸表面将阻碍氢氧化镍纳米颗粒的沉积，因而氢氧化镍和ERGO-MWNT纳米复合材料的性能可能会受到影响的。考虑到上述情况，在复杂的基体中4/1的GO / MWNT比率被认为是最佳 比例，并在以下的实验中使用。
3.5 使用Ni(OH)2/ERGO–MWNT/GCE的葡萄糖的电化学传感
3.5.1对葡萄糖的电催化效应
凭借ERGO-MWNT的凭借良好的
此外这里用到的简单的和绿色的电化学方法是制造这种新型传感器主要的优点。
3.5.3。葡萄糖检测的选择性，重现性和稳定性
如图5d所示，在葡萄糖检测干扰研究中，一些干扰物质，例如果糖，glacatose和抗坏血酸（AA）被依次加入并且被Ni(OH)2/ERGO–MWNT/GCE检测。观察到葡萄糖反应很强烈与此同时干扰物质反应较弱。考虑它们在真实样品如人血液中的相对浓度，该修饰电极对葡萄糖的检测展现了一个可以接受的选择性。通过重复性的在含有2毫摩尔葡萄糖的0.1摩尔氢氧化钠溶液中六个修饰电极独立的测量CV曲线的实验测试，和2.8％的相对标准偏差（RSD），估计为氧化峰值电流。传感器的稳定性也通过记录100μM葡萄糖的电流响应来进行了研究。在六个月连续测量的电流 - 时间曲线观察中没有明显的电流下降，相对标准偏差计算为5.9％。因此，这种非酶葡萄糖传感器的显示良好的再现性和稳定性。
3.6. 通过Ni(OH)2/ERGO–MWNT/GCE对过氧化氢的电化学传感
3.6.1.对过氧化氢电催化效应
CV曲线被用来研究对过氧化氢传感器的电催化效应，如图6a所示，与目前ERGO-MWNT/GCE相比，由于氧化和还原反应，氢氧化镍电极表现出更高的背景，以及在10mM的过氧化氢在阳极和阴极峰电流方面存在下，基于对Ni(OH)2/ERGO–MWNT/GCE传感器呈现出最大的信号。这表明它具有对过氧化氢最有利的催化能力，并且比由氢氧化镍的电极沉积在ERGO，MWNT基板或非基板更好。在不同浓度的过氧化氢的存在下得到的CV图如图6b所示。通过增加过氧化氢浓度，正向扫描的电流响应速度显著增强得到相应的实现。对氢氧化氢的ERGO–MWNT/Ni(OH)2的催化效应的电化学途径如下反应式所示：
Ni(OH)2+OH- ↔2NiOOH+H2O +e- (3)
2NiOOH+H2O2→2Ni(OH)2+O2↑ (4)
3.6.2.过氧化氢和校准曲线的计时响应
为了进一步证实Ni(OH)2/ERGO–MWNT/GCE电催化活性，对连续注射一定数量过氧化氢的计时电流响应 （例如，10μM的，100μM和500μM的）如图6C所示在0.2伏的设定电位下。可以
看出，该电极对添加的分析物在短的响应时间2秒内可快速响应。如在上部的插图所示，在从10μm至9050μM的范围内。当前为过氧化氢浓度的函数的校正曲线，表现出一个良好的线性关系(系数R2=0.997)。相应的线性回归方程为：I (μA=11.531+0.051C(μM). 检出限由此估计为4.0μM（信号 - 噪声比= 3）灵敏度为717μAmM-1cm-2。这些结果也与列出于表2的用于电解过氧化氢等的生物传感器相比，显然，Ni(OH)2/ERGO–MWNT电极显示了类似的甚至更好的分析性能。
3.6.3．过氧化氢检测的选择性，重现性和稳定性
图6d说明了以0.2 V的设定电位,在0.2 mM的过氧化氢的检测的另外的几种最常见的共存电活性剂，如钾离子，硝酸根离子，钠离子，氯离子，UA和AA。可以看出，这些化合物在检测过程中干扰不显著。在10mM的过氧化氢存在下，六个单项电极的重复性的另一个特色是CV的测量，并预计峰值电流的相对标准偏差为2.8％。所制备的电极的传感稳定性试验，对100微摩尔的过氧化氢共进行了六次连续的安培测量。观察到电流响应没有明显的下降， 并获得6.1％的相对标准偏差。这些结果表明，该传感器电极的制造过程是可靠的和重复性好的，并且由此制备的传感器在实际应用中显示出良好的稳定性检测。
3.7．实际样品分析
为了进一步验证Ni(OH)2/ERGO–MWNT非酶传感器的实际应用中的可靠性，对实际样品分析物回收进行了测试。对于血糖测定，从正常人体获得尿被用作真实样品。对于过氧化氢，它通常用作食品的防腐剂，从牛奶中获得。测试前的尿和牛奶样品在0.1M的NaOH溶液中稀释到100倍。安培测量是当分析物被掺入到细胞中。传感器检测的数量与实际添加量相比，如表3所示。可以看出，葡萄糖和过氧化氢的可接受的回收率表明我们制备的传感器在实际样品检测中是灵敏的。
4．结论。
GCE的修饰的纳米复合材料，包括氢氧化镍纳米颗粒的高效非酶传感器，ERGO和多壁碳纳米管已通过方便低成本和绿色的电化学方法制造。水分散性GO-MWNT复合物表现出独特的特性和高电荷迁移率电还原后，对氢氧化镍纳米颗粒的沉积，表现为一种理想的催化剂载体。 Ni(OH)2/ERGO–MWNT/GCE显示对葡萄糖和过氧化氢卓越的分析性能。在该纳米复合材料这三种成分的协同效果赋予该传感器具有优良的电化学性能，例如宽的线性范围，检出限低，灵敏度高，选择性好，以及良好的再现性和稳定性。这种ERGO-MWNT基复合纳米材料具有很大的潜力，并打开对非酶生物传感器的发展提供了新途径。
致谢
作者感谢由中国国家自然科学基金提供的资金支持。
（51125011）
附录A补充材料
与本文相关的补充数据可以在网络版在这里找到：
参考文献：
[1] W. Grosse, J. Champavert, S. Gambhir, G.G. Wallace, S.E. Moulton, Carbon 61
(2013) 467–475.
国际期刊的可持续发展和世界生态
16卷,第一期,2009年2月,30 36
旅游业发展的贡献到保护区管理:当地利益相关者视角
Jianying Xu a , Yihe Lü b , Liding Chen b & Yang Liu b
a大学的资源、环境和旅游,首都师范大学,北京,中国;b国家重点实验室的城市和区域性重点实验室,生态学,生态环境科学研究中心,中国科学院,北京2871信箱,100085年,中国
生态旅游在保护区,和当地人,保护区以及保护区管理中是必不可少的观光事业建立互惠关系中扮演着重要的角色。然而，要妥善管理保护区，当地的人应该是主要的利益相关者，以本地经济利益最大化，并获得支持保护力度。这项研究评估当地人民的经济参与旅游在卧龙山自然保护区的当前状态使用问卷调查。通过评估的地理来源，收入和经营者在从事的职业分布旅游相关业务，我们确定并讨论了约束和当地人民参与经济活动的机会。发现当地民众，以及当地人和非当地人之间，由于有限的启动资金和操作技能。目前，只有一小部分当地群众直接从旅游业中获得收入。另外，经济的泄漏和地方对自然资源的依赖仍然存在，在研究领域。为了促进生态旅游和可持续发展，旅游业之间的关系，当地人和生物多样性保护的研究区必须加强。根据调查结果，提供一些建议，以更好地促进保护区管理人员之间的关系。 关键词：旅游业的发展;经济参与保护区的管理，利益相关者分析，卧龙自然保护区。 介绍
生态旅游主张其在自然与人文环境之间理论的和谐关系。保护区往往被视为目的地，因为他们的自然和高品质的与旅游相关的的资源（Boo1990）人们普遍认为，在保护区的生态旅游可以带来必要的管理奖励，并对被参观地区具有最小的物理和社会的影响。主要旅游吸引力作为保护区的保护和开发工具，从理论上讲，它可以提供本地的经济利益，同时维护生态完整性通过低影响，非消费性利用本地资源（干等。 2003年）。因此，连接人与人之间，公园和旅游近年来已收到显着的关注，特别是在发展中国家，它已被链接到可持续发展的举措，保护区保护力度，区域和社会发展的策略（塞巴洛斯Lascurain1993;内农和德斯特1993）。但是，生态是一项复杂的活动，往往涉及众多利益相关者，并采取地方环保和经济脆弱地点（1993年Giannecchini）。在实践中，满足在其定义中列出的目标（Wunder2000）的范围内是很困难的，已报道了许多种环境和生态影响（Farrell和马里恩2001;安特耶等人，2004年，李等人2005年）。从旅游业的发展（2004亲吻），当地社区也经常被边缘化。保护区旅游业的理论和实践之间的差异确认保护区管理的复杂性和不确定性，必须评估保护区生态旅游辨别阻碍实现其目标的原因。然而，重要的是选择合适的参数进行评估，因为在保护区中所涉及的自然和社会经济系统。当地社区保护区旅游业的核心部分，其可持续性和经济效益最大化，加强它们之间的关系与生态旅游产业，并提高保护力度（墨菲1985; Kutay的1992年，1994年西蒙斯被视为1994年野生）。然而，经常有当地社区和生物多样性保护保护区管理（2000年Salafsky Wollenberg）的之间的冲突。因此，当地社区被选定为评估保护区旅游业由于其与旅游，生物多样性保护的联动，主要参数和保护区管理。许多研究都集中在就业机会（Belisle和1980年霍伊; Davis等人，1988）和收入来自旅游活动（墨菲1983; Davis等，1988），和当地人民的看法往往在生态评价的主要因素使用（首当其冲，1999年考特尼高和斯图尔特2002 Teye等，2002;2003年有学; Spiteri2006年和尼泊尔）。
在中国保护区的数量从1978年的34个上升到2006年的2395，占约15.16％的领土（2007
年国家环保总局）。中国的保护地区大多在偏远和欠发达地区（Han2000 Liu et al.2003），只有60万居民（苗族，2000年），人口密度一般超过60人2公里（Wu等2002）。因此，保护区的快速增长和巨大的人口压力已成为保护区管理在中国是一个挑战。由于特殊的自然资源，在保护区，旅游收入是资金的主要来源，保护区管理和提高当地人民的经济地位。但是，研究旅游当地人民的地位都有限，并有必要探测到当地人民的经济参与旅游因素影响其进入旅游业提高一般和可持续旅游发展特别保护区管理。
这项研究的主要目的是站点级评估，辨别生态旅游发展及其对当地经济的贡献。不像其他的研究，本研究专注于旅游经营者自愿订立的旅游业，他们的观点，限制和机会，为当地人民的经济参与旅游。探讨生物多样性保护，旅游开发和保护区管理的复杂性和相互之间。卧龙自然保护区被选为案例研究，因为它的复杂性保护区管理（Fu et al.2004;Lu ët al，2006年）和当地经济，生物多样性保护和可持续发展（Xu et al，2006年，2007年）之间的潜在冲突和不确定性。
方法
研究区
卧龙自然保护区是中国25个专为大熊猫保护设计的最大的一个自然保护区，大熊猫是一个在中国生物多样性保护的旗舰物种。大约100只大熊猫生活在研究区域，在中国总人口的10％。储备是成立于1963年，面积200平方公里，在1975年扩大到现在的规模2000平方公里。它于1980年升格为联合国教科文组织的生物圈保护区。储备联合国教科文组织的生物
。。。。圈保护区是四川省汶川县，中国西南地区（1022’to 10324’E, 3045’ to 3125’N）
（图1）。它坐落在成都平原向青藏高原的过渡地带。多样化的环境提供了一个家，不仅是大熊猫，但其他57个濒危动物和24种珍稀植物，包括的的金丝猴（川金丝猴）和鸽子树（珙桐皮膜）。储备管理卧龙自然保护区管理局，其下有两个乡镇政府，卧龙镇和耿达乡，1097户，总人口在2002超过4000.尽管汉储备构成的主要国籍在中国，约70 ％，当地人是由三个少数民族组成的，藏族，长安，回族There的只有一条主要道路连接本地的人到外面。 在研究领域有6个行政村，每一个委员会负责管理。四（耿达一村，二村和卧龙一村，二村）附近的主要道路，和其他两名（耿达三村和长三村禾）是远离主干道。当地居民主要依靠传统农业为生。主要农作物玉米，马铃薯，白菜，白菜是当地群众收入的主要来源之一。储备的其他就业机会，包括房屋建筑，交通运输，收集药材，森林守卫和巡逻。但是，但是，这些就业只是偶尔的。
自从卧龙自然保护区的建立，许多研究人员走访了研究区。在过去的20年，游客人数有所增加，由于其声誉作为一个有吸引力的目的地。 2003年，接待游客约80000人次参观储备根据行政管理局的统计数据。虽然有许多壮观的自然景观中的储备，大部分都是人造的，如大熊猫，大熊猫博物馆和博物馆有关动物和植物，中国园林旅游资源的开发和向游客开放。然而，一些自然和人文旅游资源，卧龙自然保护区生态旅游总体规划中列出。从区域来看，储备在旅游业发展中起着重要的作用，因为大熊猫是四川旅游的象征。卧龙自然保护区也是最有名的针对四川省大熊猫保护的保护区。此外，因为它位于城市的成都和四姑娘山（另一个著名的旅游目的地）之间，很多游客自己的方式来四姑娘山停在储备参观大熊猫。
数据收集
本研究中调查了生态旅游的业务发展和地方经济发展之间的关系，特别是当地人民的经济地位在旅游业务。根据所有权，旅游企业可以分为两类：私人和政府，后者集中在旅游资源，尤其是上面的人造旅游资源，只需要专业人士。自然旅游资源不太发展，直到现在，也没有从政府业务分发到当地群众的经济收入，因此，专注于旅游相关业务的民营运营商的数据收集工作。通过个人访谈问卷被执行期间的旅游高峰月，7月和2006年8月to74民营企业的老板。为避免潜在的偏见，它是明确与会者的采访是为了学术研究，没有任何隶属关系的管理机构或任何其他行政setup.The问卷包含固定的响应和开放式问题。固定的响应问题和可能的备选答案分别读给受访者，其次是开放性问题的答案获得一个深入的了解。固定的响应问题包括三个方面：（1）操作的一般信息，包括族群，性别，年龄，教育程度，和原产地域;
（2）经济规模的业务，包括每年的总收入，职工人数，他们的工资（3）当前的操作类型，未来发展的看法和前景。举行了非正式的小组讨论，深入探测当地人民的见解和观点。 结果
人口学特征
共74家运营商进行了采访，其中27（36.5％）受访者的餐馆老板，代表大多数的永久运营商在储备。其他临时经营谁随便从事旅游业（表1）。研究确定了永久和临时运营商 .I族群之间的差异主要人口，临时运营商最有藏族，而最永久的经营者汉。大多数受访者年龄介乎30至50岁，但临时运营商的百分比（21％）在50和80岁之间的研究组高于永久工人（4％），在教育方面，比临时工（21％和13％）更持久的接受教育（48％，初中，高中，26％）， 原产地域私营旅游经营
原装原产地域与旅游相关的民营企业经营者，这就决定了他们的居留权（本地或非本地），用于解决经济泄漏。大多数临时运营商从卧龙镇，耿达镇和保护区以外（表2）和最永久的运营商。运营商的资本持有和管理技能是其原产地域有关。卧龙镇的居民获得较少的利润，比外面的团体旅游，因为他们大多是薄利零售商。即使是当地居民的房子附近的道路，这是对游客更具吸引力，租赁给外人，每年获得租金。
收入分配
理想的情况下，旅游业务应为当地人民提供大部分就业机会和收入。然而，和提供永久运营商相比，临时运营商提供更少的就业机会，因为他们大多是小企业主，，不给别人提供就业机会。根据我们的调查，临时运营商的63％是一人操作，28％是两个人操作（总的家庭成员），和7％采用三人以上。永久运营商，除了家庭成员参与，经常聘请佣工，其人数和工资随地理起源的永久运营商（见表3）。常驻运营商从保护区以外的（非本地运营商）一般有大量的操作，并雇用更多的员工更高的工资比运营商从研究区域内。此外，从保护区以外的67％的永久运营商说，他们宁愿聘请外人，而不是当地居民，因为当地居民熟悉当地的环境难以管理，。因此，最永久的运营商自行聘请他们自己的亲戚.
就雇员工资方面而言，差异也存在本地和非本地居民之间，非本地员工接受当地员工（表
4）的两倍之多。 非本地员工技能普遍优于本地员工.，相应地 本地员工始终奉行简单的项目，如清洁剂或服务员，因此，培训或技能的缺乏限制了本地员工的收入和就业机会。 旅游经营者之间的收入分配变化的其他可能的原因进行了分析（见表5）。大多数受访者
Abstract
汽油机排气一直被认为是在中国空气污染的主要来源。由于较低的
细胞遗传毒性的影响，甲醇发动机的排气，甲醇被视为一个潜在的替代
汽油。我们以前相比，细胞和基因毒性与汽油发动机排气
在A549细胞中甲醇发动机排气（Zhang等人。，2007）。为表征的免疫系统的影响
在免疫细胞的汽油和甲醇发动机排出的废气，在这项研究中，我们进一步比较研究了气— 在RAW264.7细胞和肺泡宏对机体免疫功能的汽油和甲醇发动机排出的废气—
抗菌素 。结果表明，甲醇和汽油发动机的排气可明显抑制
RAW264.7细胞增殖，促进RAW264.7细胞凋亡，玫瑰花结形成率和减少
抑制肺泡巨噬细胞的抗肿瘤作用，同时，这些汽油发动机的影响
排气远高于甲醇发动机排气。此外，汽油发动机的排气
但fi能显著抑制肺泡巨噬细胞ADCC活性，但甲醇发动机排放
不 。这些结果表明，甲醇和汽油发动机排出的废气可能是免疫系统
大气污染物，但汽油发动机尾气一些影响可能远
高于甲醇发动机排气.
1. Introduction
在中国许多城市化。流行病学的研究表明
慢性汽油尾气暴露增加普勒风险—肺和其他肺癌以及非—癌性健康的影响（netterstrom和suadicani，1993 alfr—edsson等人。，1993；德等人。，2003；教授等人，2007；elci。 等人。，2003；郭等人。，2004b；vasama内乌沃宁等人，1999；
郑等人。，2002；汉森，2000）。但是，关系
长期暴露于汽油发动机尾气与肺癌在动物或人类仍是一个争论的问题（mauderly， 1994；郭等人。，2004a；母等人，2007）。所以IARC分类fiED气—
汽油发动机的排气为可能的人类致癌物（IARC，
1989）。由于这些潜在的健康影响的担忧—汽油发动机排出的废气的影响，由于可能较低的毒性效应—但比汽油发动机排气，类似物化学性质以及丰富的来源。甲醇已作为一个潜在清洁燃料替代汽油关于空气污染控制。
威廉姆斯等人。发现含有较低浓度甲醇发动机—颗粒物和氮氧化物的含量比汽油—发动气（威廉姆斯等人。，1990），maejima等人。表明甲醇发动机排出的废气具有潜在的毒性在大鼠肺的影响（maejima等人。，1994）。以前，我们的研究表明甲醇发动机排气表现出低的细胞毒性并没有表现出遗传毒性的体外（Zhang等人。，2007）。除了这些，一些生物影响甲醇发动机前—hausts已检查。
宿主的免疫功能是响应非常重要肿瘤（该公司等人。，2006）。增殖和凋亡—
SIS的细胞在发展中起着重要的作用，调节在组织的多细胞的细胞群的维护生物（莱斯特和jaattela，2001）。许多外源性化学物质能改变细胞增殖与凋亡细胞特征，这
会导致组织、器官的生理功能的变化。
肺泡巨噬细胞的先天是主角—免疫系统和巡逻的身体，包括肺泡表面，
可以吞噬和破坏他们phagolyso病原体—MES（研究与罗依特，2000；张等人，2000；维埃拉等人。，002。它可以吞噬异物，抗原mmunocompetent细胞和产生细胞因子，发挥作用—蚂蚁的作用在宿主防御肿瘤的发生和pulmao—RY感染（卡斯特拉诺瓦等人。，2001）。有证据表明在柴油机尾气颗粒物对肺的影响很大免疫系统，并抑制肺的免疫反应细菌感染（阴等人。，2004）。然而，到目前为止，它是nknown什么样的汽油和甲醇的影响，恩— NE尾气对肺泡巨噬细胞的免疫功能。
以前，我们比较了细胞毒性和遗传毒性的前—大片的汽油和无水甲醇发动机排出的废气（张等人。，2007）。结果表明：汽油发动机exhaustmight是一个遗传毒性的混合物，但甲醇发动机排气不会在测试的浓度范围内。这是众所周知的，除了遗传—毒性，宿主的免疫功能也非常重要—研究肿瘤的发生（该公司等人。，2006）。免疫抑制导致免疫细胞无法主机可以限制癌细胞的增殖（邹，2005）。为了进一步表征的毒性作用的汽油和甲醇发动机前— hausts，本研究进行扩展的比较对RAW264.7细胞免疫效应和活化的肺泡为进一步认识的相对贡献的巨噬细胞汽油和甲醇发动机排放的不利影响对人体健康。同时，该数据将提供新的科学—题Cfi证据对决策的替代甲醇汽油的基础上的两种类型的车辆的毒性排放量。
2. Material and methods
2.1. Materials
Dulbecco改fiED的Eagle培养基（DMEM），3 - [ 4,5-dimetho—噻唑-2-基] - 2,5-diphenyl tetrazoliumbromide（MTT）和邻菲啉—ylenediamine（OPD）是从西格玛–购买奥德里奇（St.路易斯，钼，美国）。胎牛血清的培养基化学公司（洛根，犹他州，美国）。绵羊红细胞和兔抗—绵羊红细胞血清的免疫系提供—学，四川大学。氚化胸腺嘧啶核苷（
3H-TdR）是从中国原子能研究院（北京，中国）。芽孢杆菌CAL—梅特–卡介苗疫苗是由成都生物研究所产品（成都，中国）。得到的是相当的解决方案上海三思试剂有限公司（中国）。所有其他化学品进行分析—等级。
2.2。从汽油发动机尾气制备有机提取物
凝析油提取物，particulatematters和半从汽油发动机的有机化合物的排放（EGE）是上校—收集和Zhang等人的方法制备。2007。为汽油机的废气提取物的组合物，看到车 等人。2007。
2.3。从甲醇发动机尾气制备有机提取物
凝析油提取物，particulatematters和半从甲醇发动机排气（EME）是有机化合物 收集和Zhang等人的方法制备。2007。对甲醇发动机排出的废气中提取的成分，看 亮等人。2005。
2.4。RAW264.7细胞培养
小鼠巨噬细胞系RAW264.7，购买，来自北京大学的。细胞在DMEM培养（含
10%胎牛血清，青霉素和100 LG电子/毫升100单位/毫升链霉素，pH 7.4）。细胞保持在一个潮湿的孵化器在37 C 5% CO2。当细胞生长至5–106毫升（约85%控制的影响，fl）的
trypsinizationusing 0.25%胰酶消化收获他们—罪与0.02%的EDTA和颗粒由5分钟离心法 1000转。细胞沉淀随后resuspendedwith磷—磷酸盐缓冲盐水（PBS）。细胞悬浮液被调整到一个各种实验和分析适当的浓度。
2.5。活化的肺泡巨噬细胞的准备
健康成年新西兰大白兔（体重2–2.5公斤）是从四川大学实验动物中心购（成都，中国）。动物被安置在一个干净的空气和病毒—无铝和受限制的访问，给传统的实验室饮食和自来水自由采食，并允许适应一周在一个动物设施评估协会批准实验动物护理认证。然后兔子 口服BCG–卡介苗疫苗5毫克静脉滴注—静脉注射每两otherweek。最后一次注射后2周— 等兔子，深受用戊巴比妥钠麻醉然后通过切割腹主动脉放血。气管插管和肺灌洗30毫升等分的六次的DMEM培养。回收支气管肺泡灌洗液flUID混合并离心在1800转4 C. 10分钟 从个体兔细胞颗粒随后COM—结合，洗涤，再悬浮在无酚DMEM培养基（GIBCO BRL细胞悬液，）。然后调整到合适的控制—对被分装到每口井24井、96井文化—真正的板和培养在DMEM（含10%胎牛血清，青霉素和100 LG／ml链霉素100单位/毫升，pH 7.4）。 细胞保持在一个潮湿的孵化器在37 C 5%的CO2使用不同的细胞参数的描述后。
2.6. MTT assay
汽油和甲醇发动机排出的废气的毒性按MANU MTT法检测RAW264.7细胞—制造商的指令（ATCC，马纳萨斯，美国）和一些修改—fi阳离子。布里flY，RAW264.7细胞单层用胰蛋白酶消化细胞然后收获和resuspended新鲜生长介质。细胞悬液(5二百二百毫升/毫升)阿里-引用到每个井96井培养板。24小时后incuba -31.3中被替换为新的媒介,62.5、125.0、250.0、62.5和125.0毫升/毫升工程或高速,替换-tively细胞治疗二甲亚砜(DMSO)消极的控制。最后的DMSO浓度的文化mediumdid不超过1%。的细胞培养其他24 h。(但对肺泡巨噬细胞,细胞被孵化3 h)。在实验中,细胞与酚洗red-free最低基本介质两次。180年将地中海-年和20将麻省理工(0.5毫克/毫升最终浓度)添加到每个。另一个样本孵化4 h。中被删除,150添加DMSO溶液。2分钟的板块略有动摇了促进解散蓝色甲瓒的粒子。吸光度的决心使用酶标570海里。细胞生存能力(%)=(absor -bance实验小组/复样的吸光度集团)100%。在每个测试浓度ob -细胞生存能力保留的4平行井
2.7。细胞增殖和凋亡分析
甲醇和汽油发动机尾气对RAW264.7的影响用流式细胞术测定细胞增殖。简单地说, 细胞治疗后15.6、31.3和62.5毫升/毫升工程或高速24 h 6-well培养板,细胞处理DMSO溶液 消极的控制。最后的DMSO浓度的文化中不超过1%。细胞被resuspended使用.5毫升的汉克斯平衡盐溶液(HBSS)、涡、补充道1.5毫升乙醇和漩涡,孵化1 h 4 c .离心机
样品在800 g 10分钟和送气音上清。添加到颗粒HBSS 250啊,250我的核糖核酸酶和500 ll propidium io -dide。混合物在室温下15分钟和孵化然后保持它在黑暗的4 C,然后细胞进行了分析通过流式细胞术propidium碘荧光测量在488纳米波长,通过流式细胞术分析细胞周期。使用扩散指数的细胞增殖水平进行了评估由以下公式计算:Proliferation indexðPIÞ¼ S þ G2=MG0=G1 þ S þ G2=M
本文来源：http://www.gbppp.com/xs/457484/
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